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　　發光細菌法適用于水質、工業廢水、納污水體及實驗室條件下可溶性化學物質的水質等急性毒性檢測。發光細菌法測定是一種簡便快速的生物毒性檢測方法,它不僅能測試理化法所能測定的單因子指標,尤其能快速準確的測試出環境的綜合毒性指標,具有理化法和傳統生物監測法無可比擬特點。

　　1、方法提要

　　基于發光細菌相對發光度與水樣毒性組分總濃度呈顯著負相關伊< 0.05)，因而可通過生物發光光度計測定水樣的相對發光度，以此表示其急性毒性水平。

　　水質急性毒性水平按8所述條件選用相當的參比毒物氯化汞濃度(以mg/L為單位)來表征，或選用ECSO值(半數有效濃度一一以樣品液百分濃度為單位)來表征。

　　2、發光細菌法簡介

　　2.1 發光細菌法的原理

　　發光細菌是一類非致病的革蘭氏陰性兼性厭氧細菌, 最適溫度20～ 30℃, pH6～ 9.N aCl 濃度3% , 在正常的生理條件下能夠發射可見熒光的細菌, 這種可見熒光波長在450～490nm 之間, 在黑暗處肉眼可見. 發光細菌法是利用靈敏的光電測量系統測定毒物對發光細菌發光強度的影響。毒物的毒性可以用EC50表示, 即發光細菌發光強度降低50%時毒物的濃度。發光細菌含有熒光素、熒光酶、ATP 等發光要素,在有氧條件下通過細胞內生化反應而產生微弱熒光。當細胞活性升高, 處于積極分裂狀態時,其ATP含量高, 發光強度增強。發光細菌在毒物作用下, 細胞活性下降,ATP含量水平下降, 導致發光細菌發光強度的降低。實驗顯示, 毒物濃度與菌體發光強度呈線性負相關關系, 因而, 可以根據發光細菌發光強度判斷毒物毒性大小, 用發光度表征毒物所在環境的急性毒性.這種方法是20世紀70年代后期提出的一種微生物監測新方法, 因其靈敏、快速、簡便、費用低廉則獨具特色.

　　2.2  發光細菌法測定方法

　　(1)  新鮮發光細菌培養物測定法

　　將發光細菌接種于液體發光培養基中, 在適當條件下(約20℃) 通氣培養12小時(對數生長期),用緩沖液稀釋至適當的菌濃度后加入測試管中與試液混合10-20分鐘,讀出樣品管和對照管的光強度.

　　(2)  發光細菌和藻類混合測定法

　　有些有毒物對發光細菌無直接的毒害作用,而對藻類有毒害作用,利用這一特性,把培養好的發光菌懸液和藻類懸液混合后加入測試管中與試液混合,經光照一段時間后測定發光菌的光強度變化.由于毒物對藻類的毒害而干擾藻類的光合作用,使之放氧能力下降,發光菌因缺氧其放光能力也隨機下降,因此可以根據光合作用放氧多少而導致發光菌發光強度的變化來推算出毒物毒性的大小.

　　(3)  發光細菌冷凍干燥制劑測定法

　　將培養到對數生長期的發光細菌采用特殊方法制成干燥粉劑保藏于冰箱中, 使用時取出加入緩沖液保溫平衡5-10分鐘,使其恢復到原來的生理狀態和發光水平,然后用于測試.其特點是每次使用的發光菌具有相同的生理狀態,對毒物靈敏性一致,易于定量測定,結果重復性,可比性好,操作簡便,可長期保藏,這將是該技術發展的方